PCR analiza kvalitativne interpretacije rezultata za hepatitis C

S obzirom na asimptomatski tijek i veliku vjerojatnost prijenosa HCV infekcije, dijagnoza u ranim fazama patologije je od velike važnosti. Najtočnija je formulacija lančane reakcije polimeraze. Za razliku od metoda za otkrivanje seroloških markera, PCR malo ovisi o popratnim bolestima i općem stanju pacijentovog tijela. Ali ako se potvrdi virus hepatitisa C, kvantitativna analiza, čije dekodiranje provodi liječnik, obvezna je.

HCV je ozbiljna bolest koja zahtijeva ozbiljne skupe i opasne nuspojave liječenja. Stoga se dijagnoza nikada ne postavlja na temelju rezultata jedne studije. Ako se sumnja na virusnu bolest, pacijent mora proći nekoliko ispitivanja. No, kako bi se izbjegli nepotrebni troškovi i gubitak vremena, krvne pretrage i instrumentalni pregledi provode se u fazama.

Glavne faze dijagnostičkog procesa prikazane su u tablici:

U tijeku je istraživanjeCiljevi izvedbe
Biokemijska analiza krvi i jetreOmogućuje vam da procijenite funkcionalnu aktivnost jetre, razinu bilirubina, pokazatelje jetrenih transaminaza. Prekoračenje norme 2 puta ili više ukazuje na prisutnost bolesti
Klinička ispitivanja krvi, urina i izmetaOva su ispitivanja nespecifična, ali rezultati mogu utvrditi prisutnost upalnog procesa, procijeniti opće stanje pacijenta. Otkrivanje bilirubina u urinu, promjena boje izmeta govori u prilog oštećenju jetre
Enzimski imunološki test (ELISA)Omogućuje vam da odredite kako virusnu infekciju u tijelu, tako i njezin oblik (akutni ili kronični). Nedostatak studije je vjerojatnost lažnih rezultata.
Lančana reakcija polimerazeSkupo, teško provesti, ali ujedno i najtočnija dijagnostička metoda za HCV. Omogućuje vam potvrđivanje prisutnosti virusa u ljudskom tijelu, kvantificiranje razine kopija RNA, određivanje HCV genotipa
Instrumentalni pregledi jetrePotrebno je provesti ultrazvuk trbušnih organa, utvrditi fazu fibroze, procijeniti ozbiljnost ciroze, isključiti hepatocelularni karcinom

Liječnik postavlja konačnu dijagnozu samo prema rezultatima navedenim u svim studijama. Neki lijekovi, na primjer, hepatoprotektori, vitamini su prikazani već na početku dijagnostičkog procesa. Ali ciljana antivirusna sredstva propisuju se nakon primanja svih podataka.

Što je PCR?

Tehnika lančane reakcije polimeraze poznata je već duže vrijeme i uspješno se koristi za dijagnosticiranje brojnih virusnih bolesti, a HCV nije iznimka.

Trenutno postoji nekoliko metoda za postavljanje PCR-a, ali u načelu se taj postupak sastoji od nekoliko faza:

  1. Uništavanje dvostrukog niti DNK pod utjecajem topline ili određenih kemikalija.
  2. Spajajući takozvane primere, ostatke nukleotidnog lanca RNA virusa, DNA odvojene bazom DNK (u većini modernih testnih sustava koriste se 5`-NTR regije HCV genoma).
  3. Specifični enzim, DNA polimeraza, prepoznaje primer, izaziva dodavanje drugih nukleotidnih ostataka.

Na kraju trećeg stupnja lančane reakcije polimeraze, DNA između dvaju pramera se udvostručuje, a nakon toga se genom eksponencijalno pojačava (2–4–8, itd.).

Osjetljivost suvremenih testnih sustava je 10-50 kopija RNA u 1 ml krvi.

Dekodiranje PCR-a za hepatitis C trebao bi provesti kvalificirani stručnjak. U skladu s međunarodnim standardom WHO, uzorak krvne plazme u liofiliziranom obliku koji sadrži RNA prvog genotipa virusa u koncentraciji od 105 IU / ml koristi se za kvantificiranje virusnog genoma.

Istovremeno se skreće pažnja na kvantitativne jedinice u kojima se izražavaju rezultati istraživanja. Obično je broj kopija HCV RNA označen apsolutnim ili logaritamskim crtama. Zatim se, u skladu s međunarodnim standardima, ta brojka pretvara pomoću posebnog koeficijenta u međunarodne jedinice (IU). Stoga su konačni rezultati naznačeni u IU / ml.

Za provođenje kvantitativne studije koriste se različiti ispitni sustavi i metode za formulaciju lančane reakcije polimeraze. Neki su dizajnirani za mjerenje plazme ili serumske viremije. Drugi su učinkovitiji i indikativniji u ispitivanju pune krvi..

Govoriti o normi pri tumačenju rezultata navedenih u laboratorijskom obliku nije sasvim ispravan. Činjenica je da u zdrave osobe nema RNA virusa u tijelu, a prisutnost HCV čestica, bez obzira na kvantitativni pokazatelj, ukazuje na infekciju. U budućnosti, pomoću PCR-a za procjenu učinkovitosti liječenja. Negativni rezultat je 4 tjedna uzimanja lijekova, a zatim nakon završetka antivirusne terapije (48 tjedana) govore o oporavku.

Vrste istraživanja

Provođenje lančane reakcije polimeraze uključuje utvrđivanje ne samo prisutnosti HCV RNA u krvi, već i određivanje broja kopija virusa i analizu strukture genoma. Takve mogućnosti čine PCR jednu od najinformativnijih i najtočnijih metoda dijagnosticiranja virusnog hepatitisa C.

Sve praktične metode za formulaciju lančane reakcije polimeraze date su u nastavku redoslijedom provođenja (svaki naredni test propisan je s pozitivnim rezultatom prethodnog):

  1. Visokokvalitetna PCR analiza hepatitisa C provodi se samo radi otkrivanja RNA virusa u krvi.
  2. Kvantitativni PCR test. Dešifriranje se provodi u skladu s opće prihvaćenim standardima. Ovisno o rezultatu, virološko opterećenje može biti nisko, umjereno ili veliko. Ovaj je pokazatelj jedan od prediktora ishoda liječenja HCV-a..
  3. Genotipizacija (u mnogim se privatnim laboratorijima nudi u kombinaciji s kvantitativnom analizom, što smanjuje ukupne troškove). Oznaka genotipa HCV provodi se jednim od arapskih brojeva (1 do 6). Na teritoriju Rusije se genotip 1 ili 3 češće otkriva, nešto rjeđe - 2, 4–6 dijagnosticira se u izoliranim slučajevima. Prije toga, pri korištenju režima liječenja interferonom, razni HCV odredili su trajanje i učinkovitost terapije. Suvremena antivirusna sredstva imaju širok spektar djelovanja, ali neka od njih propisana su samo s 1–4 genotipa HCV.

Genotipizacija se provodi samo jednom, prije početka terapije. Dok se uzimaju lijekovi, kvantitativne norme hepatitisa C potrebne su da liječnik ocijeni učinkovitost antivirusnih lijekova. Nakon tečaja liječenja provodi se kvalitativna PCR studija..

Značajke kvantitativne analize

Provodi se kvantitativna analiza pomoću PCR-a kako bi se utvrdilo virusno opterećenje. Pod ovim pojmom podrazumijeva se broj kopija RNA patogena u 1 ml krvi.

Zahvaljujući takvoj studiji, liječnik će moći procijeniti niz čimbenika koji imaju ključnu ulogu kako u tijeku bolesti, tako i u ishodu terapije. To:

  • vjerojatnost komplikacija (ciroza i hepatocelularni karcinom), budući da što je aktivniji patološki proces, to je veći rizik od patologija jetre već u početnim fazama hepatitisa C;
  • učinkovitost standardnog režima liječenja (u teškim slučajevima potrebno je dodatno propisivanje antivirusnih sredstava);
  • rizik za druge (posebno ako pacijent pripada socijalno sigurnim slojevima stanovništva, ima obitelj, djecu);
  • rizik od ekstrahepatičnih komplikacija (razvoj autoimunih bolesti, oštećenja živčanog, kardiovaskularnog sustava itd.).

Kvantifikacija HCV RNA također je važna za praćenje učinkovitosti liječenja. Dok nastavljate uzimati antivirusne lijekove, broj primljenih opada. Cilj terapije je postići negativan rezultat kvalitativne analize PCR-om..

indikacije

Prije pojave velikog broja privatnih laboratorija, gdje pacijent može uzeti gotovo bilo koju analizu bez dokumenata, liječnik je dao upute za kvantitativni PCR u određenoj fazi dijagnoze ili liječenja.

U skladu sa standardima i protokolima WHO-a, pokazatelji za takvo istraživanje su:

  • pozitivni serološki biljezi HCV (anti-HCV Total, prisutnost klase G i / ili M imunoglobulina);
  • pozitivan rezultat kvalitetnog PCR-a;
  • praćenje liječenja.

Po želji, pacijent se može samostalno obratiti privatnoj klinici i izvršiti sličnu studiju. Ali u nedostatku hepatitisa C, takav se laboratorijski test smatra neprimjerenim.

U kojim smo stadijima bolesti mi

Da biste odredili virusno opterećenje, slijedeće datume:

  • prije početka liječenja (moguće istovremeno s genotipizacijom);
  • 4 tjedna liječenja (negativni podaci ukazuju na brz virološki odgovor i predviđaju prediktivne ishode);
  • u posljednjem tjednu terapijskog tečaja (12 ili 24, ovisno o odabranoj shemi), negativan rezultat potvrđuje učinkovitost terapije, pozitivan zahtijeva daljnje liječenje, ali uz uporabu drugih lijekova;
  • 24 i 48 tjedana nakon završetka liječenja (bez obzira na njegovo trajanje), odsutnost virusnog opterećenja potvrđuje oporavak.

Uz to, studija se provodi samo prema indikacijama (na primjer, pogoršanje zdravlja, pogreške u uzimanju tableta, identifikacija istodobnih infekcija itd.). PCR ne isključuje potrebu za drugim analizama - kliničkim studijama krvi i urina, testovima jetre, ultrazvukom i drugima.

Kako se pripremiti za studij

Kako dekodiranje PCR analize ne bi bilo pogrešno, potrebno je pravilno pripremiti za uzorkovanje krvi. Uz neke iznimke, pravila se ne razlikuju od onih u drugim studijama..

Nužno je:

  • darujte krv strogo na prazan želudac (zadnji obrok 12 sati prije posjeta laboratoriju);
  • postupak se provodi ujutro (što je ranije moguće);
  • na dan analize, nakon buđenja možete piti samo vodu; čaj, kava, soda i / ili slatki napici, sokovi itd. kontraindicirana;
  • 3-5 sati prije darivanja krvi ne možete pušiti;
  • ako je nemoguće prestati uzimati bilo koji lijek, recite imena lijekova koji se trebaju uzeti laboratorijskom pomoćniku i liječniku koji će interpretirati podatke.

Prisutnost hepatitisa C već podrazumijeva potpuno odbacivanje alkohola i strogu dijetu (tablica br. 5). Ali ako se analiza provodi u fazi dijagnoze, 5-7 dana prije uzorkovanja krvi, nadzor prehrane obvezan je, s izuzetkom jetre i teških proizvoda..

Dešifriranje kvantitativne analize za hepatitis C

Obično, kada pacijent primi rezultate testova u ruke, obrazac prikazuje normalne vrijednosti, dobivene vrijednosti i kratku interpretaciju. Međutim, dešifriranje krvnog testa za hepatitis C mora učiniti samo liječnik. Kvantitativni PCR jedna je od faza dijagnoze, stoga liječnik uspoređuje brojke s prethodno dobivenim rezultatima.

Ovisno o dobivenim pokazateljima, određuje se stupanj virusnog opterećenja ili potpuna odsutnost HCV RNA u tijelu.

Ako se provede kvantitativna analiza za hepatitis C, dešifriranje se provodi u skladu s tablicom:

Vrijednost pokazateljaRazina virusnog opterećenja
Nije otkriven RNA virus (ili je broj kopija manji od osjetljivosti testnog sustava)Norma, osoba je zdrava ili je analiza provedena tijekom razdoblja inkubacije patologije
1,8 × 102–7,9 × 105 IU / mlSlabo virusno opterećenje. Ukazuje na nedavnu infekciju, latenciju ili antivirusnu učinkovitost.
8 × 102–2,3 × 107 IU / mlUmjereno virusno opterećenje. Obično se primjećuje u kroničnom obliku HCV-a. Prognoza liječenja je povoljna, u skladu s preporukama liječnika
2,4 × 107 IU / ml i višeVisoka viremija. Teške komplikacije (do raka jetre) su vrlo vjerojatne

Da bi se precizno dešifrirala analiza i spriječili pogrešni rezultati, moguće je procijeniti podatke kvantitativnog PCR-a tek nakon identificiranja seroloških markera kvalitativnog PCR-a. Kod IFA je nužno naznačen pozitivni koeficijent. Također uzmite u obzir podatke ultrazvučnog pregleda, elastografije i biopsije, ako je studija provedena.

Norma

Kvantitativna analiza PCR provodi se samo ako su druge vrijednosti krvi pozitivne na hepatitis C.

Dobivanje negativnog rezultata moguće je uz:

  • samoizlječenje (u medicinskoj literaturi postoje statistike prema kojima oko 15% HCV infekcija prođe neopaženo, ljudski imunološki sustav potpuno eliminira virus);
  • rani virološki odgovor (pri ocjenjivanju rezultata tijekom antivirusne terapije);
  • u slučaju pogrešnih podataka iz prethodnih studija (malo je vjerojatno, jer se obično prvo propisuju ELISA, visokokvalitetni PCR i testovi jetre).

Kad se daje test na hepatitis C radi procjene virološkog opterećenja, transkript izvodi liječnik. Smatra se da su normalni pokazatelji potpuna odsutnost HCV RNA u krvi. Ali kako bi se isključila latentna infekcija, studija se preporučuje ponoviti za nekoliko tjedana..

Količine krvi pokazuju hepatitis C

Prije nego što započnete dijagnostički pregled, morate znati točno što krvna slika ukazuje na HCV. S jedne strane, to će omogućiti pacijentu da izbjegne nepotrebne financijske troškove zbog nepotrebnih analiza, s druge će uštedjeti vrijeme.

Dakle, kod hepatitisa C sljedeći su podaci indikativni:

  • pozitivna ELISA bez obzira na klasu otkrivenih antitijela; ali ovaj se parametar procjenjuje na osnovu drugih rezultata, jer neke značajke imunološkog sustava mogu utjecati na točnost studije;
  • pozitivan kvalitativni PCR (osjetljivost i specifičnost metode doseže 100%);
  • određivanje broja kopija virusa tijekom kvantitativnog PCR-a.

Neizravni znakovi HCV-a su višak jetrenih transaminaza, bilirubin, leukocitoza, ubrzani ESR, prisutnost bilirubina u urinu.

Kod dekodiranja rezultata uzimaju se u obzir umanjenja jer je u analizama naznačen hepatitis C. Tipično je virusno opterećenje naznačeno u IU / ml ili IU / ml, a virus RNA je engleski akronim RNA HCV.

Postoji li lažni test

Za razliku od ELISA-e, vjerojatnost lažnog rezultata PCR-a praktički je nula. Pogreške su moguće samo kao rezultat ljudskog faktora, odnosno kršenje pravila uzorkovanja krvi, skladištenja uzoraka i neposrednog provođenja studije.

Prednosti PCR kvantifikacije

Stručnjaci iz područja hepatologije naglašavaju da kvantitativni PCR nema analoge i da je jedna od glavnih studija za bolesnike s HCV-om. Motor za analizu minimizira vjerojatnost lažnih pozitivnih ili lažno negativnih rezultata..

Za dobivanje rezultata potrebno je nekoliko dana. Uzorkovanje krvi ne zahtijeva posebnu pripremu, moguće je u gotovo svakom kliničkom laboratoriju i nije praćeno značajnom boli. Ali glavna prednost ove analize je njena visoka točnost, koja doseže 100%.

Kvalitativna PCR analiza za hepatitis C

Hepatologist

Srodne specijalnosti: gastroenterolog, terapeut.

Adresa: Sankt Peterburg, ul. Akademika Lebedeva, 4/2.

Hepatitis je ozbiljna bolest koja ima mnogo uzroka. U središtu njegovog razvoja je izravno ili neizravno oštećenje jetre. S obzirom na njegovu važnost za cijeli organizam, može se samo nagađati koliko je teška patologija. U ovom ćemo članku detaljnije analizirati tijek i laboratorijsku dijagnozu hepatitisa C.

Uzrok bolesti je virusno sredstvo, koje se odnosi na patogene koji sadrže RNA. Ima razlikovno svojstvo - sposobnost mutiranja, tj. Promjene svoje strukture. Zbog toga infekcija izmiče napadu imunološkog sustava i u većini slučajeva dovodi do kronične upale u jetri.

S obzirom na postojanje različitih podvrsta virusa, odabir lijekova treba provesti uzimajući u obzir rezultate genotipizacije. Unatoč dugoj studiji bolesti i strukturnih značajki HCV-a, još uvijek nije moguće razviti specifično cjepivo protiv bolesti.

Poteškoće u ranoj dijagnozi su asimptomatski hepatitisi, zbog čega osoba odlazi liječniku u fazi ciroze. Da bi se bolest otkrila na vrijeme, potrebni su redoviti liječnički pregledi. Samo laboratorijskim pretragama krvi moguće je otkriti HCV i spriječiti zarazu drugih. Činjenica je da nositelj zaraze dugo vremena ne može nagađati o patologiji i dalje prenositi virus zdravim ljudima.

Načini prijenosa

Virus se u većini slučajeva širi krvlju, jer sadrži najveću koncentraciju patogenih uzročnika. Dakle, infekcija se prenosi:

  • s hemodijalizom;
  • kada se ubrizgava zaraženom iglom;
  • u procesu borbe, kada je koža ozlijeđena i dolazi do kontakta s krvlju;
  • transfuzijom krvi (transfuzija krvi).

Vjerojatnost infekcije intimnošću je zanemariva, jer sperma i vaginalni iscjedak sadrže malu količinu patogena. Rizik od infekcije značajno se povećava s kršenjem integriteta genitalne sluznice. To se opaža s agresivnim i analnim seksom.

Što se tiče vertikalne metode prijenosa infekcije, ona se provodi u procesu porođaja. U razdoblju gestacije patogen ne može prodrijeti kroz placentu do embrija. Kod prirodnih porođaja patogeni uzročnik se prenosi djetetom kad se njegova koža ozlijedi kada se primijeti kontakt s majčinom krvlju..

Nakon što patogen uđe u zdravo tijelo, započinje sinteza antitijela koja su zaštita od infekcije i pripadaju imunološkim strukturama. Pronađeni su tijekom početnog ispitivanja osobe koja koristi ELISA.

Za potvrdu dijagnoze pacijent prolazi lančanu reakciju polimerazom. To je analiza kojom se identificira genetski materijal patogenih uzročnika i određuje virusno opterećenje..

Laboratorijska dijagnoza hepatitisa C

Laboratorijska dijagnostika započinje analizom imunosorbentom vezanim za enzim. Njegova glavna zadaća je otkriti antitijela proizvedena protiv patogena. Učinkovitost mu je gotovo 95%. Zahvaljujući ovoj studiji, u pretkliničkoj fazi, moguće je identificirati nositelja virusa i poslati ga na daljnje ispitivanje.

Kvalitativni ELISA ukazuje na prisutnost ili odsutnost imunoglobulina u pacijentovoj krvi. Njegov rezultat može biti "pozitivan" ili "negativan". Nakon prvog odgovora osoba se šalje na sljedeći ispit - PCR. Njegova cijena ovisi o kvaliteti reagensa i laboratorija. Trošak lančane reakcije polimeraze može doseći 4 tisuće rubalja.

Značajke PCR-a

Korištenjem lančane reakcije polimerazom, čak i mala količina biološkog materijala omogućava nam da procijenimo virusno opterećenje u krvi, odnosno da izračunamo koncentraciju patogena u jednom mililitru tekućine.

Pojavom PCR-a dijagnoza hepatitisa postala je puno jednostavnija. Analiza omogućava identifikaciju HCV RNA, utvrđivanje stadija zaraznog procesa i zaraznost nositelja virusa.

Postoji nekoliko vrsta genetske dijagnoze:

  1. kvalitativna analiza PCR na hepatitis C - potvrđuje prisutnost ili odsutnost HCV u krvi ispitanika:
  2. kvantitativni, zahvaljujući kojem možete izračunati koncentraciju virusa i uspostaviti stadij bolesti. Rezultat je dan u IU / ml ili kopije / ml (ovisno o laboratoriju);
  3. genotipizacija - potrebna za određivanje genotipa HCV. Ovo je potrebno za točan odabir lijekova koji će u ovom slučaju biti najučinkovitiji. Analiza neizravno ukazuje na ozbiljnost patološkog procesa u jetri. Dakle, s trećim genotipom patogena najčešće se opaža steatoza, čiji se razvoj temelji na nakupljanju masti u hepatocitima (njegovim stanicama). Osim toga, vrsta virusa utječe na ishod i trajanje terapijskog tečaja..

Kvalitativna PCR analiza za hepatitis C

Prije svega, u laboratoriju se pregledava biološki materijal na prisutnost HCV RNA. Važno je zapamtiti da kvalitativna analiza za hepatitis C ima određenu razinu osjetljivosti, te stoga ne može uvijek dati točan odgovor. U tom se slučaju preporučuje ponovljena laboratorijska dijagnostika uz korištenje drugih reagensa..

Za dobivanje pouzdanih rezultata potrebno je koristiti ispitne sustave s osjetljivošću od najmanje 50 IU / ml..

Rezultat dijagnostike može biti ili „pozitivan“ ili „negativan“. Ako se patogen ne nađe u krvi, studija završava. Ako se u uzorku otkrije patogeni uzročnik, provodi se kvantitativni izračun količine virusa..

Lažno negativan odgovor dobiva se kada je tehnološki proces narušen, na primjer, aktivne komponente koje inhibiraju izgradnju kopija patogena ulaze u okoliš. Dakle, nije moguće prikazati pravu sliku krvi, zbog koje se ne dijagnosticira ljudska infekcija..

Lažno pozitivan rezultat može se dobiti ako je epruveta za prikupljanje biološkog materijala, kao i okoliš za ispitivanje bili kontaminirani. Pored toga, takav je odgovor na analizu moguć i kod miješanih infekcija, kada jetru utječe nekoliko virusa, na primjer, hepatitis C i D.

Indikacije za kvalitativna istraživanja

Liječnik može propisati kvalitativnu studiju pacijentu za prepoznavanje RNA virusa hepatitisa C:

  • nakon primanja pozitivnog ili sumnjivog odgovora enzimskog imunološkog ispitivanja;
  • za provjeru dijagnoze;
  • određivanje virusnog opterećenja;
  • postavljanje stadija bolesti;
  • dijagnoza mješovite infekcije. Hepatitis C često pogađa jetru istovremeno s virusom D;
  • određivanje terapijske taktike na temelju genotipa patogena;
  • procjena dinamike promjena tijekom liječenja antivirusnim lijekovima.

Prednosti lančane reakcije polimeraze uključuju:

  1. visoka osjetljivost tehnike, koja omogućuje utvrđivanje činjenice infekcije u pretkliničkoj fazi;
  2. identifikacija genetskog materijala patogena, a ne protutijela na njega;
  3. sposobnost uspostavljanja podtipa patogenih uzročnika;
  4. velika dijagnostička brzina, jer nije potrebno sijati materijal na hranjivi medij, već je dovoljno koristiti specifične ispitne sustave. Osoba dobiva rezultat nakon 5 sati;
  5. univerzalnost. Analiza vam omogućuje prepoznavanje bilo kojeg genetskog materijala (RNA, DNK). Zahvaljujući tome liječnik može potvrditi hepatitis C i druge vrste bolesti (B);
  6. mogućnost otkrivanja latentne infekcije.

Kvantitativno istraživanje

U krvnom testu korištenjem lančane reakcije polimerazom moguće je izračunati broj patogena u fiksnom volumenu biološkog materijala. Pokazatelj je prikazan u IU / ml. Zahvaljujući analizi moguće je utvrditi stupanj infektivnosti pacijenta, odrediti stadij zaraznog procesa, a također procijeniti učinkovitost terapije lijekovima.

Na temelju PCR-a, specijalist odlučuje koje doze lijekova mogu blokirati umnožavanje patogena. Osim toga, određuje se trajanje antivirusnog liječenja i prognoza života. Važno je zapamtiti da su testni sustavi vrlo osjetljivi, pa metoda omogućava potvrđivanje infekcije osobe čak i u pretkliničkoj fazi.

genotipizacija

S obzirom na sposobnost patogena da mutira, njegov genotip je potreban za utvrđivanje taktike liječenja i odabir antivirusnih lijekova. Na primjer, liječenje hepatitisa HCV 1 traje 48 tjedana, a pozitivna dinamika zabilježena je samo u 60% slučajeva. Genotipovi 2 i 3 imaju povoljniju prognozu. Protivvirusni lijekovi propisuju se 8 mjeseci, a njihova učinkovitost doseže 85%.

Prema statističkim podacima, u većini slučajeva HCV 1, 2 i 3 zabilježeni su u Ruskoj Federaciji.

Kod dekodiranja laboratorijskog testa može se navesti takav odgovor - "nije upisan". To znači da virus cirkulira u krvožilnom sustavu pacijenta, koji testni sustav ne može prepoznati. Rezultat analize u ovom slučaju ukazuje na zarazu osobe s atipičnim patogenom za određeno zemljopisno područje.

Kako doći do pouzdanih rezultata?

Da bi kvalitativna PCR studija otkrila RNA patogena hepatitisa C pokazala ispravne rezultate, potrebno je ispuniti zahtjeve za pripremu za laboratorijsku dijagnozu:

  1. uzorkovanje krvi vrši se na prazan želudac, a razdoblje "gladan" ne smije biti kraće od 8 sati;
  2. dva dana prije studije preporučuje se prestati piti alkohol i odbijati začinjenu, masnu i dimljenu hranu;
  3. otkazati unošenje lijekova koji smanjuju koagulaciju krvi, na primjer, heparin. Ako su ti lijekovi propisani iz zdravstvenih razloga, potrebno je na to upozoriti liječnika. Osim toga, specijalist treba biti svjestan uzimanja drugih lijekova koji mogu utjecati na rezultat laboratorijskog ispitivanja;
  4. uoči prikupljanja biološkog materijala, fizioterapeutski postupci se ne smiju provoditi i podvrgavati se teškim fizičkim naporima.

Na rezultate analize može utjecati ne samo osoba koja daje krv, već i drugi čimbenici, a to su:

  • loše uzorkovanje krvi;
  • nepoštivanje preporuka za transport biološkog materijala;
  • nedovoljna obuka laboratorijskog osoblja;
  • neusklađenost s istraživačkom tehnikom;
  • uvođenje antikoagulansa (heparina) uoči uzorkovanja krvi. Ova skupina lijekova smanjuje koagulaciju i na taj način usporava rad reagensa.

U različitim se laboratorijima dijagnostički odgovor može malo razlikovati, međutim, ove pogreške ne utječu na konačni rezultat studije..

Posebna se pozornost posvećuje vrstama ispitnih sustava koji se koriste u laboratoriju. Često se preferiraju reagensi s visokom osjetljivošću. To je važno za bolesnike s niskim virusnim opterećenjem, jer ih je teško otkriti..

Koliko je često laboratorijsko ispitivanje?

Primarna lančana reakcija polimeraze provodi se za ljude koji su, kada je ispitivanjem imunosorbentom povezanog enzima, protutijela na uzročnika hepatitisa. U ovom je slučaju propisano da se potvrdi činjenica zaraze osobe i utvrdi stadij bolesti. Osim toga, analiza vam omogućuje utvrđivanje podvrsta virusa, što je posebno važno za izbor lijekova.

Sljedeće razdoblje obveznog laboratorijskog ispitivanja je 3 mjeseca od početka antivirusne terapije. Dijagnoza omogućuje procjenu učinkovitosti lijekova, prilagodbu doze ili zamjenu.

Uz osnovne testove, PCR se može dodatno provesti u 4 i 24 tjedna od početka liječenja. Pozitivna prognoza bolesti potvrđena je smanjenjem virusnog opterećenja nakon tri mjeseca terapije. Tako bi se, na primjer, trebao smanjiti s milijun IU / ml na nekoliko stotina tisuća.

Ako koncentracija patogenih uzročnika u krvi ostane na istoj razini ili se neznatno poveća, to ukazuje na neučinkovitost antivirusnih sredstava i zahtijeva zamjenu. Korištenjem PCR-a na kraju liječenja, moguće je potvrditi oporavak pacijenta.

Da biste ispravno protumačili rezultate laboratorijske dijagnostike, potrebno je savjetovanje s hepatologom ili specijalistom zaraznih bolesti. S obzirom na visoku učestalost lažnih odgovora u ELISA-i, analiza se koristi isključivo za primarni probir. Za temeljitiji pregled pacijenta koristi se lančana reakcija polimerazom..

Točni testovi na hepatitis C

Točna dijagnoza hepatitisa C provodi se samo u laboratoriju putem krvnih pretraga pacijenta. Za to se koristi nekoliko tehnika:

  • enzimski imunosorbentni test - ELISA, koji vam omogućuje da odredite prisutnost antitijela na hepatitis C. U različitim fazama razvoja bolesti detektira se u krvi nekoliko vrsta protutijela - IgM, IgG;
  • lančana reakcija polimeraze - PCR je učinkovita i točna 100% analiza za hepatitis C jer omogućuje izravno identificiranje RNA virusa hepatitisa C, a ne protutijela na njega.

Pod različitim uvjetima, obje ove studije mogu dati lažno pozitivne i lažno negativne rezultate testa, tako da za najtačniju dijagnozu samo kombiniranjem ovih rezultata može se dobiti točna slika dijagnoze. Ako je ELISA metoda dala pozitivan rezultat, tada se definitivno provodi PCR analiza hepatitisa C. Ako također daje pozitivan rezultat, dijagnoza se potvrđuje, a pacijentu se kaže da ima hepatitis C. Ako je test ELISA pozitivan, a PCR negativan, to znači da je osoba zdrava! Često se to događa nakon liječenja hepatitisa C ili nakon prenošenja hepatitisa C u akutni oblik, koji tijelo u potpunosti izliječi.

Takvi slučajevi se također događaju. Otprilike 15-20% pacijenata može se razboljeti bez da to shvate i bez ikakvih napora za vlastiti oporavak!

Nakon liječenja hepatitisa C, PCR test redovito se provodi godinu dana kako bi se provjerilo stabilnost virološkog odgovora. Uz kvalitativni test krvi PCR-om, provodi se i krvni test na virusni teret i genotipiziranje virusa hepatitisa C. Normalna vrijednost je odsutnost virusnog opterećenja. Genotip virusa nakon liječenja može se promijeniti. Ovo upućuje na zaključak da je prevladavajući genotip uspješno izliječen, ali sad treba tretirati i drugi. Bilo je slučajeva kada je pacijent imao tri genotipa hepatitisa C. To zahtijeva ozbiljno dugotrajno liječenje. Analiza genotipa virusa pokazuje samo prisutnost genotipa virusa hepatitisa C koji prevladava u krvi.

Hepatitis C, kako ga pobijediti?

Da biste pobijedili hepatitis C, ne morate sjediti i nadati se čudu ili alternativnom lijeku, već idite na hepatološku kliniku gdje iskusni liječnici liječe hepatitis C. Iskustvo liječnika je od presudne važnosti za uspjeh terapije, jer samo teorije liječenja ova složena virusna bolest nije dovoljna! Danas se uz klasičnu metodu liječenja virusnog hepatitisa C - Interferon i Ribavirin, koristi najnoviji režim liječenja nove generacije lijekova - Harvoni. Riječ je o proizvodu farmaceutske tvrtke iz Amerike, koji uključuje dva nova lijeka - Sofosbuvir i Ledipasvir. Oni imaju potpuno drugačiji učinak na virus, što omogućava brzo i učinkovito liječenje..

Hepatitis C i zatvor

Virusni hepatitis C uzrokuje poremećaje u gastrointestinalnom traktu. Pacijenti mogu osjetiti mučninu, gorčinu u ustima, žgaravicu, poremećaj stolice - proljev ili zatvor, kao i napuhanost i nadimanje..

Kvalitativna analiza za hepatitis C: transkript

Uzrok razvoja virusnog hepatitisa C je infekcija patogenom koji pripada obitelji Flaviviridae. Između infekcije i početka stvaranja antitijela detektira se duži vremenski interval koji ne omogućava pravodobnu dijagnozu bolesti pomoću enzimski imunosorbentnog testa.

PCR analiza za hepatitis C, biokemiju, OAC, testove funkcije jetre provodi se ako se sumnja na infekciju. Pomoću lančane reakcije polimerazom, virus se može otkriti u krvi već u prvom tjednu infekcije, što je dominantna prednost metode.

Kvantitativna i kvalitativna analiza hepatitisa C i značajke studije, kako se pripremiti, postoje li pogreške, dešifrirati - detaljno ćemo razmotriti.

Koja je metoda lančane reakcije polimeraze??

Lančana reakcija polimeraze - tehnika molekularnog istraživanja za određivanje genetskog materijala virusnog agensa od prvih dana infekcije. Analiza se odlikuje visokim stupnjem pouzdanosti, specifičnosti, točnosti. Zahvaljujući njemu otkriva se ne samo odsutnost / prisutnost virusa, već i virusno opterećenje (kvantitativna vrijednost), genotip.

Studija zahtijeva krv pacijenta, u kojoj se navodno nalazi RNA virusne infekcije. U laboratorijskim uvjetima, primeri se dodaju u biološku tekućinu - to su umjetno sintetizirani fragmenti željenog gena male duljine. Plus RNA polimeraza je specijalizirani enzim koji višestruko povećava koncentraciju željenog materijala..

Nadalje, krv s dodatkom komponenata nekoliko puta se zagrijava i hladi u posebnom uređaju. Zatim slijedi analiza dobivenih rezultata, usporedba s poznatim genima virusnog agensa. Na temelju toga donosi se zaključak o bolesti.

Vrste PCR istraživanja

Analiza PCR hepatitisa C provedena je u laboratoriju s dodatkom potrebnih reagensa, ima tri vrste s karakterističnim karakteristikama:

  1. Kvalitativna PCR analiza za hepatitis C prvi je korak u studiji. Kroz njega se u krvnom serumu otkriva genetski materijal patogena.
  2. Kvantitativno istraživanje omogućava vam da procijenite opterećenje virusa - ovo je sadržaj virusnog materijala u 1 ml pacijentove krvi. Izvodi se prije početka tečaja liječenja, a zatim nakon 1-4-12 tjedana terapije. Kad je tečaj dug, studija se mora provesti nakon 24 tjedna terapije kako bi se procijenila učinkovitost.
  3. Genotipizacija. Zarazna bolest se brzo razvija, virus ima tendenciju mutiranja. Stoga je potrebno identificirati genotip virusa.

Znanstvenici su identificirali 7 genotipova virusa. U Ruskoj Federaciji 1-2-3 vrste bile su vrlo česte.

Svaki od genotipova karakterizira otpornost na liječenje..

Na primjer, s tipom 1, učinkovitost terapije je oko 60%, u usporedbi s 2-3 vrste, pokazatelj doseže 85%.

Za odabir pravog lijeka, trajanje liječenja, potrebno je utvrditi ne samo činjenicu infekcije, već i koncentraciju virusa, njegov genotip.

Indikacije za

Označivači za hepatitis, PCR i ELISA, ostala ispitivanja imaju određene medicinske indikacije:

  • Kada pacijent ima povijest HIV infekcije, AIDS-a.
  • Kontakt sa zaraženom osobom jer je virusni hepatitis vrlo zarazan.
  • Simptomi ciroze jetre - hepatomegalija, povećanje veličine slezene, venski uzorak pojavio se na trbuhu itd..
  • Klinika funkcionalnog poremećaja jetre - periodična / stalna bol u desnom hipohondriju, požutjelost kože, mučnina.
  • Visoke vrijednosti AST i ALT u biokemiji krvi.
  • Tijekom trudnoće, kada su loši testovi rada jetre.
  • Prije početka antivirusnog tečaja za određivanje virusnog opterećenja.
  • Za praćenje učinkovitosti terapije.
  • Nakon terapije za sprječavanje recidiva virusne infekcije.

PCR se provodi s potvrđenom dijagnozom hepatitisa B kako bi se isključio mješoviti oblik oštećenja jetre.

Priprema studije i uzorkovanje materijala

Kako se pripremiti za analizu, liječnik će reći. Da bi se dobio točan rezultat, pacijentu se preporučuje priprema. Sastoji se od sljedećih preporuka:

  1. Analizu treba uzeti ujutro, na prazan želudac. Prije uzorkovanja krvi može se piti samo čista negazirana voda. Posljednji obrok - 8 sati prije ograde.
  2. Ako ne možete položiti test ujutro, to možete učiniti navečer ili na ručak, što je najvažnije - 5-6 sati nakon jela, a ne ranije.
  3. 48 sati prije studije odustanite od alkohola, kofeinskih napitaka, sokova.
  4. 2 dana morate slijediti dijetu, isključujući sve štetne proizvode. Međutim, neki liječnici vjeruju da masna, pržena hrana ne utječe na točnost PCR studija..

Ne uzimajte lijek 24 sata prije medicinske manipulacije. Ako to nije moguće, obavijestite svog liječnika. Analiza se ne preporučuje obavljati odmah nakon ultrazvuka, CT-a, masaže i drugih fizioterapeutskih postupaka.

Uzorkovanje krvi je sljedeće:

  • Pomoću posebnog štapa koji se zategne na pacijentovoj podlaktici liječnik zaustavlja protok venske krvi. Vene postaju vidljivije, što olakšava postupak umetanja igle, naknadno uzimanje krvi.
  • Područje kože prije uvođenja sterilne igle tretira se tekućinom koja sadrži alkohol.
  • Igla se umetne u venu, nakon čega se na nju pričvrsti cijev, u koju ulazi krv.
  • Nakon umetanja igle, snop se uklanja. Skupite potrebnu količinu krvi, izvadite iglu.
  • Na mjesto ubrizgavanja nanosi se pamučni tampon namočen u alkohol..

Da biste spriječili stvaranje modrice na mjestu uboda, pamučni tampon morate čvrsto pritisnuti na ozlijeđeno područje, saviti ruku i držati ga u tom položaju 3-4 minute.

Ako pacijent uzima lijekove koji pomažu razrijeđivanju krvi (Aspirin, Warfarin), mogu postojati određeni problemi sa zaustavljanjem krvarenja..

Prednosti PCR-a u odnosu na druge testove

Metoda lančane reakcije polimeraze ima određene prednosti u odnosu na druge dijagnostičke metode..

Prednosti studije prikazane su u tablici:

Izravna dijagnoza patogenaOstale studije daju odgovor - postoji li u tijelu patogen ili ne. Ali pomoću PCR metode, možete posebno utvrditi vrstu virusnog agensa.
Specifičnost studijePCR određuje jedinstven fragment DNA koji odgovara samo jednoj vrsti virusnog agensa. To umanjuje mogućnost pogreške..
Visoka osjetljivostMože se otkriti čak i mala koncentracija virusa u krvi..
Identifikacija svih patogenaTijekom studije možete otkriti sve patogene uzročnike.
Skrivene infekcijePored virusnog patogena, moguće je identificirati infekcije koje imaju latentni tijek, karakterizirane visokom antigenom.

Kada pacijent dobije pozitivan rezultat, to će značiti da je u biološkoj tekućini detektiran genetski materijal za patogene hepatitisa. Negativni rezultat - nema tragova virusa.

Dešifriranje rezultata

Liječnik bi trebao dešifrirati rezultate na temelju zaključka koji pacijent prima u laboratorij. Potrebno je analizirati podatke u kombinaciji s pokazateljima biokemije, OAC-a, ultrazvuka.

kvaliteta

Kvalitativna studija će pokazati prisutnost ili odsutnost uzročnika virusne bolesti u ljudskoj krvi. Mogu biti dvije mogućnosti - negativan (norma) ili pozitivan rezultat.

Obrazac ponekad kaže: otkriven ili nije pronađen.

Pozitivan rezultat - laboratorijski asistent otkrio je genetski materijal virusnog agensa u pacijentovoj krvi, infekcija je potvrđena. Negativni zaključak - nema infekcije, fragmenti RNA virusa su ispod granice osjetljivosti.

kvantitativan

Kvantitativna analiza podrazumijeva nekoliko opcija ishoda. Radi praktičnosti, predstavit ćemo ih u obliku tablice.

ProizlazitiDešifriranje
negativnoTo je norma za zdravu osobu. Zbog toga, ispitivani biološki materijal ne sadrži virusnu hepatitisnu RNA, odnosno sadržaj je manji od pragova osjetljivosti.
Do 1,8 * 10 ^ 2 IU / mlKaže da je sadržaj RNA manji od raspona kvantifikacije. Taj rezultat treba tumačiti pažljivo, jer se smatra kontroverznim. Pored toga, provode se i druge studije za naknadnu usporedbu. PCR test se također ponavlja..
Do 8 * 10 ^ 5 IU / mlSlabo virusno opterećenje. U pravilu, takav rezultat znači da je liječenje učinkovito..
Od 8 * 10 ^ 5 IU / mlVisoko opterećenje virusa. Liječenje je potrebno odmah (ako se ne provodi) ili je potrebna korekcija lijekova.
2,4 * 10 ^ 7 IU / mlRNA je veća od gornjeg maksimuma za kvantifikaciju. U skladu s takvim rezultatom, virusni teret se ne ocjenjuje. Potrebno je opetovano razrjeđivanje uzorka tjelesne tekućine..

genotipizacija

Rezultat - Otkrivena je ribonukleinska kiselina određenog genotipa. Uz naznaku genotipa i podtipa, laboratorijski zaključak zaključuje latiničnim slovima i brojevima. Na primjer, genotip 1a. Ukupno 7 genotipova, 67 podtipova.

Rezultat - Otkrivena RNA virusnog hepatitisa C - ovo je DNK rijetkog genotipa koji se ne može pripisati uobičajenim virusnim uzročnicima, stoga je potrebna dodatna dijagnostika.

Kad je PCR negativan a ELISA pozitivan

Hepatolog ili specijalist za zarazne bolesti dešifrira zaključak laboratorijskog pomoćnika. Uvijek postoji rizik od primanja lažnog negativnog ili lažno pozitivnog rezultata. Ponekad se dogodi da je PCR negativan, a ELISA pozitivan.

To znači da trenutno nema virusa u krvi pacijenta, ali on je patio od akutne bolesti. Općenito je prihvaćeno da ELISA pokazuje antitijela koja proizvodi imunološki sustav nakon invazije na patogen..

ELISA u usporedbi s PCR karakterizira niska pouzdanost i pouzdanost, pa se koristi kao primarni probir. Pri dijagnosticiranju virusnog hepatitisa bez lančane reakcije polimeraze ne može učiniti.

Trošak ispitivanja hepatitisa C

Možete uzeti testove u bolnici, gdje je pacijent promatran, ako postoji njegov laboratorij, ili se obratiti privatnom centru uz naknadu.

U kratkom vremenu rezultat možete dobiti u laboratorijskim centrima poput Hemotest, Invitro, Helix.

Trošak istraživanja ovisno o laboratoriji:

Naziv usluge laboratorijaPolitika cijena
spirala· Troškovi prikupljanja biološkog materijala - 170 rubalja.

· Kvalitativni + kvantitativni PCR test - 3990 rubalja.

· Identifikacija protutijela na virusnu bolest - 1500 rubalja (2-3 dana).

· Provjera aktivnosti virusa prije početka tečaja - 4090 rubalja.

In vitro· Kvantitativno otkrivanje RNA virusa hepatitisa C PCR - 3140 rubalja.

· Unos biološkog materijala (venska krv) - 199 rubalja.

· Procjena virusnog opterećenja u stvarnom vremenu - 18 000 rubalja.

· Visokokvalitetni ultra osjetljivi test - od 3000 rubalja.

· Genotipiziranje - od 1250 rubalja.

Hemotest· Cijena kvantitativnog istraživanja je 2200 rubalja.

· Visokokvalitetna dijagnostika od 700 rubalja.

· Određivanje RNA patogena - od 4000 rubalja.

· Uzorkovanje krvi iz vene oko 150 rubalja.

Trajanje studije je prosječno 2-3 dana. U nekim laboratorijima postoji usluga kao hitna analiza, njegova cijena je 1,5-2 puta veća. Moguće je nazvati i medicinsku službu kod kuće radi darivanja krvi i rezultate dobiti e-mailom ili osobno prilikom kontaktiranja laboratorija.